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液相色譜柱的使用注意事項及再生

1 、色譜柱的使用說明：
（ 1 ）、 色譜柱使用前注意事項：
色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用 10 ％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。
（ 2 ）、 流動相：
流動相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過 0.45μm 的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的 PH 值適用范圍是 2.0-8.0 ， BDS C18 適合于堿性化合物， PH 值適用范圍為 2.0-10.0 。當(dāng)必須要在 PH 值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并*置換掉原來所使用的流動相。
（ 3 ）、 樣品：
樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱（ SPE ）對樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
2 、色譜柱的保存
（ 1 ）、 反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：
使用緩沖液或含鹽的流動相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用 10% 的甲醇 / 水沖洗 30 分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗 30 分鐘。 注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入 10% 的甲醇，防止將填料沖塌陷。
（ 2 ）、 長期保存色譜柱：
如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑*或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。
3 、色譜柱的再生
因?yàn)樯V柱是消耗品，隨著使用時間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說可能是柱效下降。
（ 1 ）、 反相柱的再生 ： 依次采用 20-30 倍的色譜柱體積的甲醇：水 =10 ： 90 （ V/V ），乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
（ 2 ）、 正相柱的再生 ： 依次以 20-30 倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。
4 、色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法
色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），可能的原因有如下幾點(diǎn)：
（ 1 ）、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；
（ 2 ）、色譜柱頭的填料被樣品污染；
（ 3 ）、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出；
（ 4 ）、流動相 PH 值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。
解決辦法如下：
（ 1 ）、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在 10 ％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗 10 分鐘，后再用純水超聲 10 分鐘，重新裝入色譜柱。
（ 2 ）、如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。
（ 3 ）、如確定定是鹽結(jié)晶，用 10% 的甲醇 / 水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
（ 4 ）、如果因 PH 值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)。
 
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